Der römische Offizier Sebastian sollte seinem christlichen Glauben abschwören, um als Leibwächter des Kaisers Diokletian dienen zu können. Als er sich weigerte, wurde er an einen Baumstamm gefesselt und von den kaiserlichen Bogenschützen, die im Hintergrund des Bildes sichtbar sind, hingerichtet. Ihre Pfeile durchbohrten seinen Körper, doch überlebte er die Hinrichtung. Gemalt wurde es für die Kirche Santa Maria Maggiore in Florenz, in der das Bild am ersten Pfeiler rechts hing.